实验室操作规范

细胞收集（抽血）：

1.实验室负责人需提前1天接到抽血具体时间的通知，准备工作相关事宜。

2.工作前实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30分钟。

3.洁净室内操作人员清洁后提前20分钟穿戴无菌服帽、口罩，无菌手套等，进入洁净室，做好工作前准备。

4.抽血前10分钟由实验室专门人员穿戴整齐携带灭菌后的无孔消毒盘进入治疗室，等待抽血，仔细阅读知情同意书并在知情同意书上签字 。

5.将刚抽取的血液放入灭菌后的无孔消毒盘中迅速送到实验室传递窗，洁净室内操作人员将血液从传递窗取出运送至操作室对细胞进行收集。

6.实验结束打扫完毕后，再次将实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌15分钟。

细胞培养：

1.根据治疗方案确定好细胞培养计划。

2.细胞培养期间应每天观察细胞生长状态并做好相关培养工作。

3.细胞培养时间约为15天，若发现因细胞生长等原因需要延长培养时间应及时通知上级领导，一般来说回输时间不能提前。

4.在回输或冻存前需完成细胞质量控制，对细胞进行无菌检测和细胞数量活率检测。

5.如因患者自身或其它原因，需要延迟回输，及时将细胞冻存。

6.培养过程要严格遵守无菌室相关规章制度和操作方法：

①工作前实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30分钟；

②洁净室内操作人员清洗后穿戴无菌服帽、口罩，无菌手套方可进入洁净室，无菌手套操作前需用75%酒精纱布擦拭；

③实验所使用器械器具均要事先灭菌，使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等要确保无尘无菌；

④点燃酒精灯，超净台内应避免放入过多的物品；

⑤打开各类瓶盖前先过火，以固定灰尘；

⑥打开的瓶口、试管口过火焰，镊子使用前应经火焰烧灼；

⑦同一根吸管或滴管不应连续用于几个不同的细胞系；

⑧吸取培养基的吸管应离开培养瓶或试管口，避免伸入培养瓶口或试管口；以防止细胞系的互相混杂污染；

⑨漏在培养瓶上或台上的液体，立即用酒精棉球擦净；

⑩实验结束打扫完毕后，再次将实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌15分钟。

细胞回输：

1.实验室负责人需提前1天接到回输具体时间通知，准备工作相关事宜。

2.工作前实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30分钟。

3.实验室内由至少2人确认所需回输的细胞和放置位置。

3.洁净室内操作人员清洁后应在回输时间提前1小时穿戴好无菌服帽、口罩，无菌手套等，进入洁净室，做好工作前准备。

4.如需取出冻存细胞，洁净室外工作人员穿戴整齐将所需细胞从液氮罐取出并迅速放入传递窗，洁净室内操作人员立即 对细胞进行复苏。

5.将细胞放入细胞袋前再次对细胞进行镜检，观察细胞活性和数量、确保回输细胞的安全有效，同时留取一小部分放入微生物培养皿中。

6.将装有细胞的细胞袋做好相关标记后放入灭菌后的无孔消毒盘内，并连同细胞质控表一同放入传递窗，由洁净室外工作人员穿戴整齐后送入治疗室交于相关人员。

7.放入回输细胞的微生物培养皿做好标记放入培养箱中，继续观察15天，如有异常立即报告。

6.实验结束打扫完毕后，再次将实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌15分钟。

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