（1）赖氨酸偶联（酰胺键形成）
通过活化酯（如 NHS 酯）与赖氨酸的胺基反应形成酰胺键。这是最普遍的偶联方法之一。代表性工作：
卟啉-NHS 酯偶联抗 CD104 单抗：在 UM-UC-3 细胞中 IC₅₀ = 0.09μM，比 HSA/BSA 偶联物的 LD₅₀ 低一个数量级
Pyropheophorbide-a 偶联 HuHMFG1 抗 MUC1 抗体：用于 Barrett 食管和食管腺癌的概念验证，670 nm 激光照射下显著杀伤 OE19 细胞
苯并卟啉单酸 A 环（BPDMA）偶联西妥昔单抗：负载比 7:1，对 EGFR 过表达的 CHO 细胞选择性蓄积，光毒性显著
二氢卟吩 e6（Chlorin e6）偶联曲妥珠单抗：负载比 1:1，在异种移植瘤中蓄积量比游离 Chlorin e6 高 6 倍
IRDye700DX（酞菁）偶联西妥昔单抗：670–710 nm 照射，体内肿瘤生长控制良好；偶联纳米抗体时 90% 肿瘤组织出现坏死
IRDye700DX 偶联曲妥珠单抗 + 5-FU：联合化疗显示协同效应，ADC 诱导凋亡、5-FU 诱导坏死
酰胺偶联的主要缺陷：偶联均一性不足，光敏剂若非特异性地负载到表位结合区会阻碍免疫反应，且负载过高会引起自淬灭。
（2）异硫氰酸酯偶联
异硫氰酸酯在水相中比异氰酸酯更稳定，是与赖氨酸偶联的常用温和试剂。代表性工作：
5,15-二苯基卟啉（DPP）单异硫氰酸酯偶联抗 EpCAM/抗 CD104 抗体：在 CORL23 细胞中 IC₅₀ 低至 0.17 μM，比游离卟啉（6.25 μM）降低 37 倍
AB₃ 卟啉异硫氰酸酯偶联 35A7 / FSP77 单抗：内化性 35A7 偶联物 IC₅₀ = 4.2μM，显著优于非内化性偶联物
两性单/三阳离子 DPP 偶联抗 CD146 抗体：LD₅₀ 比非偶联卟啉低 10 倍
异硫氰酸酯路线被证明化学上比异氰酸酯更具通用性，可产生具有高特异性和可接受光毒性（低 μM 范围）的 ADC。
（3）马来酰亚胺偶联（半胱氨酸定向）
通过还原二硫键释放游离巯基，再与马来酰亚胺发生位点特异性、化学计量的偶联。代表性工作：
（4）"点击"化学偶联（CuAAC 与 SPAAC）
铜催化炔-叠氮环加成（CuAAC）：用于预功能化的曲妥珠单抗 Fab 片段，仅需 3 当量卟啉即可完成偶联，对 HER2 阳性细胞 BT-474 在 1×10⁻⁶ M 下杀伤 91%。
无铜应变促进炔-叠氮环加成（SPAAC）：通过二溴哒嗪二酮张力炔实现全抗体位点特异性偶联，每个抗体负载 4 个卟啉，LD₉₀ = 625 nM。
（5）树突倍增技术（Dendron Multiplier）
在 SPAAC 基础上，利用芳醚树突承载 2、3 或 4 个卟啉，与曲妥珠单抗 IgG 偶联：
（6）SNAP-Tag 偶联
利用自我标记蛋白 SNAP-Tag 将 Chlorin e6 偶联到抗体片段：
（7）四吡咯-纳米颗粒-抗体三元偶联物
纳米载体本身可通过 EPR 效应被动靶向肿瘤，再结合抗体主动靶向可实现双重靶向：
金纳米颗粒 + 卟啉 + 抗 ErbB2 抗体：卟啉-PEG 偶联物负载比高达 3882:1
金纳米颗粒 + 锌酞菁 + 抗 HER2 抗体：10 nM 即可诱导 SK-BR-3 细胞死亡，机制为凋亡
上转换纳米颗粒 NaYF₄:Yb,Er + 锌酞菁 + 曲妥珠单抗：利用 975 nm 近红外光源，通过单线态氧生成杀伤 HER2 阳性乳腺癌细胞
金纳米棒 + 卟啉 + 曲妥珠单抗：光热治疗与 PDT 协同，显著减小异种移植瘤体积，4 小时内主要通过膀胱和肾脏排泄
