1 基本数据梳理
（a）Ct：表示的是循环阈值，基因和管家基因（内参，一般是β-Actin或者GAPDH或者α-tubulin等，具体内参根据组织或者细胞而定）有其对应的Ct值；
（b）△Ct：表示的基因Ct值减去管家基因Ct值（即： △Ct =Gene△Ct- Housekeeping gene Ct）；
（c）参考Ct：一般选择对照组的△Ct的均值（即：means/average of NC group △Ct）；
△△Ct：基因的△Ct值减去参考Ct（即：△△Ct =△Ct- 参考Ct）；
（d）2^-△△Ct：即取底数为2，指数为-△△Ct即为（2^-△△Ct），在excel中输入方法（英文状态）有两种：（1）“=power（2, -△△Ct）”，（2）“=2^-△△Ct”（^符号的输入方式先按住键盘shift，然后按数字6（可以在键盘上看到数字6的上边有“^”））；
（图1 英文状态输入“^”图片展示）
2 qRT-PCR计算mRNA相对表达量计算
可以根据如下格式排列自己的数据，然后根据不同颜色的指引，进行△Ct，△△Ct，2^-△Ct的计算，最后得出mRNA的相对表达量（已经非常详细了，能看懂了吧，对于初学者，文末会将excel上传，大家可以跟着模拟学习，其它数据一般来说是触类旁通！！！）。
（图2 △Ct，△△Ct，2^-△Ct计算方法与解读）
3 GraphPad统计与作图
（1）打开GraphPad软件
这里就选择柱状图就行 “column”（红框标记）。
（图3 GraphPad工作界面）
（2）数据导入
将excel中的数据直接拷贝进去就行（普通的复制-粘贴办法即可），然后将“data tables”命名“results analyze”（建议命名为英文，因为有的童鞋用盗版软件使用中文会乱码），接下来将不同组的数据根据组别进行排列。
（图3 excel中数据复制并粘贴到GraphPad中，并进相应的命名）
（3）形成图片
（图4 选择Graphs形成图片）
（图5 选择图片展示形式，在此选择Mean/median & error，然后点击ok即可）
（图6 图片展示的形式）
（4）图片信息调整
将图片正下/上方的信息删除，将Y轴的信息改为“Relative expressionof Gene mRNA”（基因一般用斜体）。
（图7 信息修改好的图片形式）
（5）图片美化
文字美化，一般选择默认的Arial字体，或者修改为“Times new Roman”，只需要选择所有的字体即可（拉个选框选中即可）；Y轴的字体改变需要单独选择进行修改。
（图8 字体更改设置操作）
图片颜色，双击柱状图的柱子
（图9 图片颜色，柱子边线等设置操作）
（图10 调整完成后展示）
（6）Y轴数值调整
（图11 Y轴数值展示调整操作）
