帕金森病，这个以“手抖、僵硬、行动迟缓”为特征的神经退行性疾病，正影响着全球数百万人的健康。然而，我们对其发病机制和潜在治疗手段的探索，很大程度上依赖于一个关键工具——动物模型。

🧷 信息卡（速览）

• 推荐品系：C57BL/6J（对 MPTP/PFF 最敏感、资料最全）。

• 性别与年龄：雄性 8–12 周表型更稳；雌性可用但 MPTP 反应偏弱（雌激素保护）。

• 实验环境：温湿度恒定、昼夜节律固定；MPTP 会致低体温，必要时加温板。

  
  

🧪 两套常用的小鼠 PD 模型 SOP

下述为主流文献范围与新手友好剂量，不同批次/体重/载剂差异显著；务必先做小样试验并遵守伦理与化学/生物安全。

SOP 1｜MPTP 系统注射模型（常用）

原理：MPTP 过 BBB → 星形胶质 MAO-B 代谢为 MPP+ → 通过 DAT 进入 DA 神经元并阻断复合体 I，黑质-纹状体轴选择性损伤。
适用：药效学、线粒体/氧化应激、炎症-神经胶质研究；运动缺陷 3–7 d 出现，2–4 周稳定。

对象：C57BL/6J 雄性 8–12 周。
配制与安全：MPTP-HCl 溶于无菌生理盐水（现配现用，避光），双层手套+一次性罩衣+生物安全柜操作；污染面用次氯酸或漂白粉溶液处理。

给药方案（任选其一）

• 急性 1 日法（经典）：20 mg/kg i.p. × 4 次，每次间隔 2 h；行为缺陷明显、损伤集中。

• 亚急性 5 日法：30 mg/kg i.p. × 1 次/日，连 5 天；损伤均匀、死亡率低。

• 慢性低剂量：10–15 mg/kg i.p. × 3–5 次/周，连 4–5 周；更接近缓进型，炎症读数好。

  
  

避坑要点

• 温度：MPTP 可致低体温—低体温会“保护”神经元，造成假阴性；注射后保温、固定昼夜节律。

• 笼位与交叉暴露：MPTP 动物单独笼位，换笼与垃圾按危险化学品处理。

• 药物干扰：避免合用 MAO-B 抑制剂 或 DAT 抑制剂（会改变毒性）。

  
  

SOP 2｜6-OHDA——SD大鼠（稳定单侧偏瘫）

原理：6-OHDA 被 DAT/NET 摄取，在神经元内产生活性氧并毒杀 DA/NA 神经元；需立体定位直接注入纹状体/黑质/内侧前脑束（MFB）。
适用：单侧模型对称对照强；药效学/细胞治疗/回路学极友好。

术前准备

• 6-OHDA 现配于0.2% 抗坏血酸生理盐水，冰上避光

• 分组：将SD大鼠分为两组，模型组（6-OHDA注射）和对照组（含0.2% 抗坏血酸生理盐水注射）

注射位点与剂量（示例，务必以《小鼠脑图谱》最新版校正坐标）

• 背侧纹状体（DS）：单点或多点注射，2–4 µg/µL，0.5–1.5 µL/点，0.1 µL/min；等待 5–10 min 再退针。

• MFB：损伤更完全快速，1–2 µg/µL，0.5–1.0 µL；术后死亡率略高。

• SNpc：相对少用（回流风险大）。

  
  

行为与验证

• 2–3 周：旋转实验（APO 0.5–1 mg/kg 或 d-安非他明 5 mg/kg）；立柱试验（患侧前爪接触次数↓）；步态/细杆。

• 3–4 周：TH 免疫立体计数（SNpc）、纹状体 TH 终末密度；HPLC-DA；Iba1/GFAP。

• 成功标准：SNpc TH+ 细胞≥50–70% 单侧丢失，旋转不对称显著。

  
  

避坑要点

• 手术低温、失血、回流都会影响表型；保持恒温、慢速注射、原位静置。

• 坐标因头架与体重略有差异，先行示踪染料或极低剂量预实验。

  
  

📏 读数体系｜至少“三联证据”并行

1) 行为学（运动为主，兼顾非运动）

• 转棒（Rotarod）：学舌后测试；潜伏跌落时间↓。

• 细杆（Beam/Pole test）：转身/下杆时间↑。

• 立柱（Cylinder）：患侧前爪支撑比例↓（6-OHDA尤敏感）。

• 步态（CatWalk/Footprint）：步长、支撑相、摆动相。

• 握力/吊网：肌力与耐力。

• 非运动：嗅觉掩埋食物、肠道推进试验、焦虑/抑郁样（EPM/NSF）按需选用。

  
  

2) 组织学/病理

• TH 免疫：SNpc 立体计数（避免仅看切片OD）；纹状体 TH 终末密度。

• 神经炎症：Iba1（微胶质）、GFAP（星形胶质）形态与密度；炎症因子 ELISA/qPCR。

• 线粒体：复合体 I 活性、TEM、ROS/MDA/GSH。

  
  

3) 神经化学/电生理

• HPLC-ECD：纹状体 DA/DOPAC/HVA；

• DAT/VMAT2 蛋白或配体结合；

• 在体多巴胺释放（FSCV/微透析）或纤维光度/光遗传按条件选择。

  
  

🧯 常见翻车点与解决

• MPTP 表型弱/不稳：批次差/体温低 → 固定批次与注射时段；保温；避免 MAO-B/DAT 干扰药。

• 6-OHDA 术后表型差：回流/坐标偏差 → 慢速注射＋驻针 5–10 min；按体重微调坐标；地昔帕明保护别漏。

• 行为假阳性：运动能力差或焦虑干扰 → OFT/握力作为控制，固定测试顺序（低应激→高应激）。

3 行快读

1. 小鼠 PD 模型主流三系：神经毒素（MPTP、6-OHDA）、蛋白质病理（α-突触核蛋白 PFF/AAV 过表达）、遗传模型（SNCA/LRRK2/Parkin/PINK1 等）。

2. 读数不靠单一行为：运动表型（转棒/细杆/立柱/步态）+ 多巴胺系统（TH 免疫＋立体计数/HPLC-DA）+ 病理（pSer129-α-syn、神经炎症、线粒体功能）三联证据最可靠。

3. 先问科学问题再选模型：线粒体/氧化应激？蛋白聚集与传播？免疫炎症？药效筛选？不同问题→不同模型与时间窗。

   
   

🎯 选型决策树

• 线粒体-氧化应激/药效快筛 → MPTP（系统注射）

• 单侧纹状体/黑质脱多巴胺、稳定“偏瘫”表型 → 6-OHDA 立体定位注射

• α-syn 聚集与病理传播 → PFF（preformed fibrils）接种

• 长期过表达/细胞自主毒性 → AAV-SNCA（或A53T）黑质注射

• 家系突变/通路遗传 → LRRK2-G2019S、SNCA-A53T、Parkin/PINK1/DJ-1、GBA1（多为轻/慢性、与诱发结合更稳定）

  
  

🧪 两套常用的小鼠 PD 模型 SOP

下述为主流文献范围与新手友好剂量，不同批次/体重/载剂差异显著；务必先做小样试验并遵守伦理与化学/生物安全。

SOP 3｜α-突触核蛋白 PFF 接种（聚集与病理传播）

原理：体外聚集的 α-syn 纤维（PFF）在脑内“播种”，诱导pSer129-α-syn 病理沿神经网络传播，随后迟发性 DA 神经元丢失。
适用：蛋白聚集/传播、炎症-胶质反应、长期药效。

关键材料与质控

• 重组小鼠/人 α-syn 体外聚集制得 PFF，TEM/ThT质控纤维形态与荧光；超声至短片段（50–150 nm）。

时间线与读数

• 1–2 月：pSer129-α-syn 病理在纹状体/皮层/黑质出现；轻度行为改变。

• 3–6 月：SNpc TH+ 细胞丢失 30–50%，运动表型稳定；炎症读数（Iba1/GFAP）上升。

• 兼做：溶酶体-自噬、线粒体、突触蛋白改变；消化道/嗅球播散可作为“肠-脑轴/嗅球起源”变体。

避坑要点

• PFF 质量即生命线：每批做 TEM/ThT；冻融次数≤1；操作Biosafety 2。

• 进针/回流控制同 6-OHDA；对侧 PBS或热变性 PFF为阴性对照。

  
  

SOP 4｜AAV-SNCA 过表达（慢性细胞自主毒性）

原理：AAV（2/5、2/6、9 等）介导 SNCA（野生型或 A53T）在黑质 DA 神经元过表达→α-syn 聚集/应激/迟发性死亡。
适用：基因-药物干预、时序可控、表达剂量可调。

要点

• 载体与启动子：TH/PRSx8/EF1α 等，滴度 ≥1×10¹² vg/mL；注射 1–2 µL/侧。

• 时间线：4–8 周出现轻中度行为缺陷；8–12 周 TH 下降与 pSer129-α-syn 上升；炎症与突触改变同步。

• 验证：qPCR/Western（SNCA）、TH 免疫、pSer129-α-syn、Iba1/GFAP；行为同上。

避坑要点

• 表达剂量窗口要先摸索（过低无效，过高致炎症性坏死）；

• 病毒操作 BSL-2；对照用 AAV-GFP 或空载体。

  
  

📅 典型时间线（整合版）

• MPTP（亚急性）：Day 1–5 注射 → Day 7 行为 → Week 2 TH/HPLC。

• 6-OHDA（纹状体）：术后 Week 2–3 行为 → Week 3–4 取材。

• PFF：术后 Month 1–2 病理出现 → Month 3–6 TH↓ + 行为。

• AAV-SNCA：Week 4–8 行为 → Week 8–12 病理/TH↓。

  
  

🧑‍⚕️ 伦理与安全（必须遵守）

• IACUC/等同伦理审批；最小动物数量与人道终止标准（体重↓>15%、行动不能、体温过低）。

• 化学品安全：MPTP/6-OHDA 设专门操作区，废液与垫料按危化/医疗废物处理。

• 生物安全：PFF/AAV 均按 BSL-2；锐器/污染物分类高压或化学灭活。

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