免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)结合了解剖学、免疫学和生化技术，通过使用适当标记的抗体来原位特异性结合其靶抗原，对组织中的离散成分进行成像，结合细胞核染色进而分析其蛋白定位，同时根据染色的深浅预测蛋白相对表达。从而，免疫组化可以可视化和记录细胞内特定细胞成分的高分辨率分布和定位，并在其适当的组织学背景下，定性蛋白。虽然免疫组化方法中有多种方法和排列，但所涉及的所有步骤分为两组:样品制备和样品染色。免疫组化用于疾病诊断、生物学研究和药物开发。例如，使用特定的肿瘤标志物，医生使用免疫组化来诊断肿瘤是良性还是恶性，确定其分期和分级，并确定细胞类型和转移的来源，以便找到原发肿瘤的部位。多种其他非肿瘤性疾病和病症的诊断使用免疫组化作为主要工具或作为确认程序。在研究环境中，免疫组化可以单独使用，也可以与其他分析技术结合使用，用于研究正常组织和器官发育、病理过程、伤口愈合、细胞死亡和修复以及许多其他领域。免疫组化也用于药物开发，通过检测靶组织和其他部位疾病标记物的活性或上调或下调来测试药物功效[1-3]。免疫组化染色是一种可转移的技能，广泛用于癌性肿瘤的诊断和分类、分子生物标志物的定位以及生物组织中多种表达蛋白的鉴定。由于其在疾病信息学和药物开发等领域的广泛适用性，IHC 是现代蛋白质化学和病理学实验室中常用的研究工具 [1,2]。
(图1 IHC确定蛋白的定位，左图为细胞核 [3]，右图为细胞质 [4])研究人员还通过免疫组化来开发新的药物治疗方法。免疫组化帮助研究人员更多地了解身体最小的部分是如何工作的，比如你的细胞和它们内部的分子。免疫组化提供了对疾病如何影响这些过程以及哪些治疗可以有所帮助的见解[3]。诊断病情(Diagnose a condition):IHC允许医疗保健诊，例如断癌症等恶性疾病。它可以帮助确定患者组织的癌症类型(例如，癌症、黑色素瘤或肉瘤)。它还允许医疗保健提供者确定扩散的癌症(转移性癌症)的起源。确定预后(Determine prognosis):IHC可以确定癌症的高风险或侵袭性。它还可以帮助医生对癌症进行分期和分级。这些信息可以帮助医生确定最佳的治疗方案。预测治疗反应(Predict treatment response):免疫组化可以识别肿瘤组织的特征，为癌症对治疗的反应提供线索。例如，病理学家可以识别在雌激素和睾丸激素等特定激素存在的情况下可能生长的乳腺癌和前列腺癌。这些癌症可能对阻断这些激素的治疗(激素疗法)反应最好。监测治疗反应(Monitor treatment response):免疫健康检查允许提供者监测治疗是否有效，促进身体摆脱疾病。
(图2小细胞肺癌的形态学和免疫组化[6]。对于癌相关marker蛋白的标记，可以根据有无棕色着色和着色深浅判断癌症。)
移液枪、恒温箱、水浴锅/微波炉（抗原修复使用）、免疫组化笔、计时器、湿盒、盖玻片、中性树脂等。（1）组织切片脱蜡：二甲苯中浸泡10分钟×3次，消除组织和组织周围的石蜡；（2）组织复水：无水乙醇10分钟-95%乙醇 10分钟-75%乙醇10分钟，蒸馏水1分钟，然后置于PBS缓冲液中；（3）抗原修复：高压修复/沸水修复/微波修复这里采用沸水修复，即将组织切片置于100℃水浴锅中，作用10分钟*3次，作用过程中，防止水沸腾脱片，抗原在水浴锅中加入一个烧杯，在充满沸水的烧杯中进行修复，完成抗原修复以后使用阻断笔将组织画圈；（4）内源过氧化物酶阻断：加入适量的内源过氧化物阻断剂，室温（25℃）孵育10分钟；PBS润洗3分钟*3次；（5）封闭：滴加100μL或适量的封闭工作液（山羊血清），室温孵育10-15分钟，倾去封闭液，勿洗；（6）一抗孵育：根据组织块大小，添加适量一抗工作液，37℃孵育60分钟，PBS润洗3分钟*3次，（或者4℃孵育过夜，效果会更好）；（7）生物标记素标记：添加对应适量的生物标记素（如羊抗兔IgG/羊抗鼠Ig），室温孵育10-15分钟，PBS润洗3分钟*3次；（8）辣根酶标记链霉卵白素：添加适量的辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温孵育10-15分钟，PBS润洗3分钟*3次；（9）显色：加入适量的新鲜配制的DBA（1:40-1:100），室温孵育5-8分钟；（10）苏木精复染：苏木素孵育2-5分钟（可1分钟后进行镜检，根据镜检结果确定是否终止染色），分化，冲洗反蓝（未过染色可以不反蓝）；（11）切片脱水：组织片通过70-80-90-100% 乙醇各10秒，然后在透明二甲苯中作用1分钟后擦净封片（不要自然干燥，否则会造成干燥不完全或者干燥过度）；（爱自己！！！做科研!!! 每文格言“作家松浦弥太郎曾说：“所谓人生困境，不过你胡思乱想，自我设置的枷锁。”一个真正成熟的人，往往很少在意外界的变化，更不会自动带入别人的角色，替他人烦心。”如果有用，关注楼主GBhouse，点赞+讨论是博主持续更新的动力！！！私信必须有转发或打赏）[1] A course‐based research experience: how benefits change with increased investment in instructional time.
[2] Introducing immunohistochemistry to the molecular biology laboratory
[3] Chromosomal Instability in Hodgkin Lymphoma: An In-Depth Review and Perspectives.
[4] Understand Protein Expression in Tissue with Immunohistochemistry (IHC).
[5] https://my.clevelandclinic.org/health/diagnostics/25090-immunohistochemistry.
[6] Genetic alterations and protein expression in combined small cell lung cancers and small cell lung cancers arising from lung adenocarcinomas after therapy with tyrosine kinase inhibitors.
