建立小鼠肝纤维化模型主要有三大类方法：化学药物诱导法、胆汁淤积性模型 和 饮食诱导模型。其中，四氯化碳（CCl₄）诱导法 是最经典、最常用的方法。下面我将详细介绍这几种方法，并以CCl₄法为重点，提供详细的步骤和注意事项。原理： CCl₄被肝细胞色素P450酶代谢生成高毒性的三氯甲基自由基(·CCl₃)，引发肝细胞脂质过氧化和坏死，从而激活肝星状细胞（HSCs），导致胶原纤维过度沉积，形成肝纤维化。缺点： CCl₄有剧毒，需在通风橱操作；对肝外器官有一定损伤；小鼠死亡率相对较高。1. 动物选择：通常选择6-8周龄的雄性C57BL/6或BALB/c小鼠。雄性小鼠对CCl₄更敏感，个体差异小。2. 试剂准备：CCl₄原液。溶剂（非常重要）： CCl₄必须用溶剂稀释后才能腹腔注射，常用溶剂为橄榄油或玉米油。通常配制成10% 或20%的油溶液（v/v）。例如，1 mL CCl₄ + 9 mL橄榄油，充分混匀。剂量与频率：最常用的是每周2次（如周一和周四），剂量为0.5-1.0 mL/kg体重 的CCl₄油溶液（例如，一只20g的小鼠注射10-20 μL的10% CCl₄溶液）。首次注射建议从低剂量开始，观察小鼠状态。造模周期：通常需要 4-8周。4周时可形成轻度至中度纤维化，6-8周形成重度纤维化或早期肝硬化。4. 对照组设置：必须设置溶剂对照组，即用同等剂量和频率的橄榄油（不含CCl₄）注射小鼠。体重：每周称重2次。成功造模的小鼠体重增长会明显减缓甚至下降。精神状态： 造模组小鼠会出现毛发凌乱、精神萎靡、活动减少等情况。血清：采集血液，分离血清，检测 ALT（谷丙转氨酶）和 AST（谷草转氨酶） 水平，评估肝损伤程度。石蜡切片 & H&E染色：观察肝脏组织结构、肝细胞坏死、炎症细胞浸润等情况。天狼星红（Sirius Red）染色：金标准。胶原纤维被染成红色，可在偏振光显微镜下观察I型和III型胶原，并可进行定量分析。肝羟脯氨酸（Hyp）含量测定：胶原蛋白的特异性氨基酸，其含量可精确反映肝脏总的胶原沉积量，是定量评估纤维化的生化金标准。分子生物学检测：提取RNA或蛋白，通过qPCR、Western Blot等技术检测纤维化相关基因（如α-SMA, Collagen I, Collagen III, TGF-β1等）的表达水平。原理： 通过手术结扎并离断胆总管，导致胆汁无法排出而淤积在肝脏内，胆汁酸对肝细胞产生毒性作用，从而诱发胆管周围纤维化。优点：复制了临床梗阻性黄疸的病理过程；造模时间短（2-3周即可形成显著纤维化）。缺点：需要精湛的显微外科手术技术；手术创伤大，术后护理复杂；死亡率高；模型主要用于研究胆汁淤积性肝纤维化。步骤：麻醉小鼠后，开腹找到胆总管，进行双重结扎并在中间剪断，然后关腹。假手术组只分离胆总管但不结扎不剪断。- 用手术剪逐层剪开皮肤及肌肉等组织；将肝叶、胃及部分肠管轻轻拨开；
- 继续向下可见胆管常附着于一小段肠管之上；使用缝合线轻轻地挑起胆管，此时可以清晰地看到透明胆管；轻柔钝性游离一小段胆管；埋置2条手术缝合线并分别打手术结；线头留取长度不宜过短，约0.5cm即可；并从两个结扎处的中间将胆管剪短；确认腹腔内无脏器损伤或出血后，以棉签轻轻复位肝叶、胃及肠管。
视频分享（造模视频）（侵权删）
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原理：缺乏胆碱会抑制肝脏的β-脂蛋白合成，导致脂肪无法从肝脏运出，形成脂肪肝；补充乙硫氨酸会加重肝损伤。长期喂养可导致脂肪性肝炎（NASH）和肝纤维化。优点：很好地模拟了人类非酒精性脂肪性肝炎（NASH）相关的肝纤维化进程；无创。缺点：造模周期非常长（通常需要16-24周甚至更久）；成本高昂（特殊饲料价格贵）；纤维化程度个体差异较大。1. 从CCl₄模型开始：这是最经典、文献支持最多、最容易上手的方法。2. 严格注意安全：操作CCl₄时务必在通风橱内，佩戴手套、口罩和护目镜。3. 预实验至关重要：不同批次、不同来源、不同品系的小鼠对CCl₄的敏感性可能不同。先用小批量小鼠摸索最佳剂量和频率。4. 伦理申请：所有动物实验都必须经过所在机构的动物伦理委员会审查和批准。5. 精心护理：造模过程中，确保小鼠有充足的食物和水，垫料保持清洁干燥，可适当在饮水中添加葡萄糖或电解质以帮助小鼠恢复。编者有话说：
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