在前几期的流式染料推送中，我们介绍了市面上常见的荧光染料种类，主要图解了流式仪器的光学组件及荧光通道光学信号的收集过程，但似乎还不明白如何选择荧光染料，接下来的两期，我们将图解如何选择多色流式荧光染料。
一、确定待检测的抗原及表达量，如：分析某一个表达量较少的膜蛋白分子在小鼠心脏单细胞悬液中免疫细胞（包括巨噬细胞，粒细胞等）、内皮细胞、成纤维细胞中的表达情况，可列出下表抗原分子检测表格。
二、查询可选用的流式染料。利用各大流式公司的官网查询，常用的抗原所偶联的荧光染料有很多，可根据实际需求进行不同方式的组合，但正如前几期图解中提到的，必须考虑流式仪器的激光器种类和每个激光器对应有哪些荧光通道（此点在下面的图解中会具体解释）。
更为简便的方法是寻找流式抗体的一级试剂商查询国内现货。
此处的原则是优先安排对荧光染料有限制的抗原，如本例子中的某表达量少的膜蛋白分子，依据弱表达抗原选择强荧光染料，强表达抗原选择弱荧光染料，给其安排BV421或者PE-Cy7等强荧光染料，具体荧光染料相对强弱表如下图所示。
其他抗原分子又要怎么选择呢？则根据原则一：优先不同激光激发的荧光染料，如FITC/APC, PE/APC，再根据原则二：每个检测通道只能对应检测一种荧光染料，也就是说，两种荧光染料是同一通道检测，则两者不适合同时使用，更为专业的名称为荧光对等染料（如下表所示），如BV421与eFluor450不适合同时使用，再结合流式抗体染料的现货情况及到货速度决定合适的染料。
那么流式染料就基本选择完成啦，当然还有一些染料的选择原则，感兴趣的同学可以进一步搜索相关资料进行学习哦，参考资料也附上了一些学习网页，可供大家学习~那今天的小问题就是，我选用了PerCP-Cy5.5 anti-mouse Ly6G，但是在上机时（仪器型号为：BD FACSymphony A5 SE）发现并没有PerCP-Cy5.5的检测通道名称，那我选用PerCP-Cy5.5是不对的吗？（P.S：下面这张光谱图就告诉你答案了哟，不妨试着举一反三），咱们下期再见~上一期留下的小问题，不知道大家有没有思考，其实原理很简单，在这台流式仪器（BD LSRFortessa X-20）上，BV711和PE-Cy5.5两种荧光染料是由不同激光器激发，却用相同的滤光片收集光信号，是因为激光器并不是同时进行激发，具体的激光器激发顺序在上机的软件上都能查询，所以机器能识别是由紫色Violet还是黄色Yellow激光器激发的光信号，你想到了嘛~
以上就是今天的全部内容啦，特别欢迎大家通过后台留言、公众号菜单栏“更多—读者的话”栏目留言给我们提建议，希望我们能一起成长，共同进步哟！
2.https://www.bdbiosciences.com/content/dam/bdb/marketing-documents/lsr_fortessax20_filter_guide.pdf3.https://www.bilibili.com/video/BV1D94y117aX/?spm_id_from=333.337.search-card.all.click&vd_source=890c0759094710d0eae7af4679c541933. 4.https://zhuanlan.zhihu.com/p/4858000365.https://www.bdbiosciences.com/zh-cn/resources/bd-spectrum-viewer
