➡️EthidiumHomodimer-1 (EthD-1)
主要用于染色死细胞。它与细胞核结合后,可发出红色荧光,常用于检测细胞的死亡状态。由于带有较强正电荷,所以该染料不能穿过细胞膜进行活细胞染色,但是可以准确的检测溶液中的核酸或者解体细胞中的核酸,是一种较灵敏的核酸染色剂。
常用于活细胞(尤其是早期凋亡细胞)的染色。它能穿透细胞膜,与细胞核中的DNA 结合,显示出蓝色荧光。Hoechst 33342对细胞的毒性作用更小,因此一般Hoechst 33258用于细胞固定后再染色,而Hoechst 33342则可以对活细胞直接进行染色。
DAPI是一种常用的可以穿透细胞膜蓝色荧光DNA染料,可对DNA染色的细胞核染色试剂,DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI,荧光强度比Hoechst低,但光稳定性高于Hoechst,有毒。
PI 是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。在细胞死亡过程中,细胞膜通透性增加,PI 能够进入细胞内部并与 DNA 结合,从而指示细胞的死亡状态。它是一种溴化乙啶的类似物,在嵌入双链 DNA 后释放红色荧光。
➡️活细胞线粒体染色 and 固定细胞后线粒体染色
分为两种:
🌟固定影响染色效果的染色剂;固定不影响染色效果的染色剂。
🌟一旦线粒体被探针标记,细胞就可以用醛基固定剂进行处理,以便对样本进一步处理;而有些线粒体探针会在细胞固定之后受到破坏,这类探针只适合活细胞染色,不能用于后续实验,例如免疫荧光。(说明书会阐明)
活细胞肌动蛋白染色:Rhodamine Actin Label (SiR-Actin)基于荧光团若丹明硅(SiR)和与肌动蛋白结合的天然产物。SiR-Actin可在活细胞中以高特异性和低背景标记F-肌动蛋白,是低细胞毒性、高特异性、可通过活细胞的细胞呈象探针。
固定细胞肌动蛋白染色:最常见的固定细胞中肌动蛋白染色剂是鬼笔环肽偶联物(phalloidins)。通过结合和稳定纤维状肌动蛋白(F-actin)发挥功能,并有效防止肌动蛋白纤维解聚。由于其与F-肌动蛋白的紧密和选择性结合,从而显示微丝骨架在细胞中的分布。
也可以考虑使用免疫荧光法对固定细胞中的肌动蛋白染色。包括α-actin (ACTA1)、平滑肌α-actin(ACTA2)、细胞质β-actin(ACTB)、心肌α-actin(ACTC1)、细胞质γ-actin(ACTG1)、平滑肌γ-actin(ACTG2/ACTA3)。针对不同亚型的肌动蛋白,可选择不同的特异性一抗。ActinGreen™ 488 , ActinRed™ 555, Tubulin Tracker也可。
常见的针对活细胞中溶酶体的荧光探针包括LysoTracker™, LysoBrite™ 系列,由于其对酸性细胞器有高度选择性(溶酶体内部pH约3.5~5),因此可以对溶酶体进行特异性染色。相比LysoTracker™,LysoBrite™探针具有更明显的优势。LysoBrite™染料可以在活细胞中停留超过一周,细胞毒性比较小,而LysoTracker染料只能维持几个小时。
ER-Tracker™ 系列的染色探针针对的是活细胞,对ER具有高度选择性。这些染料很少染色线粒体,且细胞毒性很小。还有一类荧光鞘脂衍生物,如NBD C6-ceramide、BDP FL-ceramide等,也是ER/高尔基体在活细胞中的重要染色探针之一。
6、细胞膜标记