一、平台简介
1．全方位服务内容
流式平台为医科大和医科院各课题组以及校外科研人员提供优质流式细胞分析和分选上机服务、实验抗体方案设计及下游数据分析服务。同时定期进行用户理论与实践培训，培养能够独立操作分析仪的高阶用户。
2．核心技术应用方向
平台主要运用流式细胞分析和分选技术对外周血、淋巴器官、各器官组织以及病变组织内的免疫细胞进行数量、表型和功能分析，揭示生理或病理状态下组织微环境内的免疫学特征，为解析免疫细胞发育成熟、细胞命运可塑性、分化及活化的调控机制以及疾病的病理生理学机制等重要科学问题提供技术支持。
3．先进仪器设备布局
(1) 流式分析仪：两台 LSRFortessa X-20 ，实现5激光18色20参数检测；一台 Cytek Aurora全光谱流式细胞仪，能轻松实现高达40色组合，包括荧光发射光谱高度重台的染料；分析平台可以满足用户从基础到高阶的多元检测需求。
(2) 流式分选仪： 一台 FACSAria Fusion （4激光、13色）；一台量化成像全光谱流式细胞分选仪 FACSDiscoverTM S8 （5激光、78个检测通道）。 FACSDiscover™ S8融合高速成像+全光谱流式+自动化分选“3合1”的功能，可检测 78 个荧光通道以及9大空间图像特征参数，为细胞分析提供丰富、全面的数据；CellView™高速图像技术可提供细胞实时图像，有助于直观观察细胞形态，实现更精准的细胞识别、分类和分选，还能揭示荧光信号中的空间信息，实现荧光定位分析，在圈门和分选优化时可借助图像信息，提升分选质量。
二、仪器设备
1. BD LSRFortessa™ X-20
BD LSRFortessa™ X-20
配置 5 根固态高功率激光器，波长包括 355nm、405nm、488nm、561nm 和 640nm，提供灵活的光谱选择，可满足各种荧光染料和抗体的激发需求，实现 5 激光 18 色 20 参数检测。
仪器参数
BD LSRFortessa™ X-20
（5-laser，18-color[6V50-2B60-3R40-4YG50-3UV15]）
Laser Name | Mirror Filter | Primary Fluorescence | Alternative Fluorescence |
405nm Violet Laser
| 780/60 | BV786 |
|
710/50 | BV711 | EFLUOR 700 |
670/30 | BV650 | EFLUOR 650 |
610/20 | BV605 | EFLUOR 605 |
525/50 | BV510 | AmCyan，V500 |
431/28 | BV421 | V450，EFLUOR 450， Alexa Fluor405，Cascade blue，Pacific Blue |
488nm Blue Laser | 710/50 | PerCP-Cy5-5 | PerCP，BB700，7AAD |
530/30 | FITC | Alexa Fluor® 488，GFP，BB515 |
640nm Red Laser
| 780/60 | APC-Cy7 | APC-CH7 |
710/50 | Alexa Fluor® 700 | APC-R700 |
670/30 | APC | Alexa Fluor® 647 |
561nm YG Laser
| 780/60 | PE-Cy7 |
|
670/30 | PE-Cy5 |
|
610/20 | PE-CF594 | PE-Texas Red |
586/15 | PE |
|
355nm UV Laser
| 740/35 | BUV737 |
|
450/50 | DAPI | Indo-1 |
379/28 | BUV395 |
|
2. Cytek Aurora
Cytek Aurora Full Spectrum Cytometer
仪器参数
（5-laser，64 Fluorescence Channels（16UV-16V-14B-10YG-8R）
3. BD FACSAria Fusion
BD FACSAria Fusion
仪器参数
BD FACSAria Fusion
（4-laser, 13-color[3V-6B-2R-3UV] ）
Laser Name | Mirror Filter | Primary Fluorescence | Alternative Fluorescence |
405nm Violet Laser
| 610/20 | BV605 |
|
525/50 | V500 | BV510，AmCyan |
450/50 | BV421 | Pacific Blue |
488nm Blue Laser | 780/60 | PE-Cy7 | RealBlue 780 |
695/40 | PerCP-Cy5.5 | PerCP，7AAD，BB700，RB705 |
616/23 | PE-Texas Red | PE-CF594，PI，FVS620 |
585/42 | PE | PI，FVS570 |
530/30 | FITC | Alexa Fluor 488，GFP，BB515 |
633nm Red Laser | 780/60 | APC-Cy7 | APC-H7，FVS780 |
670/30 | APC | AF647，FVS660 |
355nm UV Laser
| 740/35 | BUV737 | 备注：紫外3个通道尚未安装完毕，暂不能使用 |
515/30 | BUV496 |
379/28 | BUV395 |
4. FACSDiscover™ S8
FACSDiscover™ S8
（5-laser, 78-color[Imaging-3 Blue-16 Violet-20 YellowGreen-12 Red-8 UV-22]）
三、服务项目
平台服务项目（不接受会传播人类病原菌的有害生物样本或放射性样本）
1. 流式细胞分选：无菌细胞分选：各种细胞系，原代细胞，单细胞悬液等。
2. 流式细胞分析：
（1）免疫表型分析：细胞活化和共刺激分子、及相关受体检测等。
（2） 细胞功能研究：细胞凋亡和增殖、胞内细胞因子、转录因子、线粒体功能检测等。
（3） 其他应用：细胞绝对计数、胞内蛋白磷酸化检测、CBA多因子检测等。
3. 外包服务：
平台除提供仪器使用及数据分析服务外，还可提供细胞制备（外周血，脾脏，淋巴结，肿瘤组织等）、细胞染色（表面和胞内染色）、上机和数据分析一条龙服务。客户只需提供样本，我们为您完成实验并提供结果。若有需求，请电话咨询。
四、流式分析仪培训申请
所有用户必须参加流式平台培训课程并通过考核后才能获得预约和使用资格。培训内容包括三个部分：1.理论培训 2.上机实践培训 3.考核。用户分为两类： 普通用户和自助上机用户。普通用户必须完成培训内容1，自助上机用户必须完成上述3项培训内容。
1. 理论培训：
(1)培训申请和时间：
请提前一周将“培训申请表”（下载路径：医科院官网→平台建设→流式细胞平台）交至流式平台报名。平台将根据报名人数安排理论培训时间，每月一次培训，具体时间请关注平台通知。
(2)培训内容：
1)流式细胞术基本原理；基本构成及功能；
2)DIVA软件使用介绍；
3)流式对照设置；
4)光谱重叠与补偿调节；
5)数据分析
2. 上机实践培训：（每次不超过5人）
(1)申请者需具备以下条件：
1)已经完成理论培训；
2)获得所在课题组PI推荐，请提供PI推荐信；
3)跟随有经验的用户进行流式细胞仪上机实习累计超过10小时，请提供实习证明信；
4)需要承诺使用流式平台超过2小时/周。
* 满足上述条件的人员请携带所需材料至流式平台预约上机培训。
(2)时间： 培训时间请随时关注平台工作人员的通知。
(3)内容： 平台使用管理条例和上机操作SOP。
1)样本准备：必须预先使用70um Cell Strainer过滤样本。
2)开机前准备工作：检查鞘液桶、废液桶状态，能够正确完成鞘液添加和废液倾倒(防止线路螺旋导致传感器破坏)；FortessaX20尤其需要注意检查各处连接是否正确，鞘液桶称重等。
3)开机程序：打开BD FACSDiva软件，仪器是否连接(选择菜单栏Cytometer-Connect)；开机后Fortessa X20的正确排气泡操作和上样管路反冲操作。
4)Diva软件介绍：各个对话框功能及如何调出；如何建立文件夹、实验及荧光参数设置。
5)Fortessa X20 3色补偿实训。实验数据记录及阈值设置；上样速度调节、设门方法等；根据需要完成手动补偿和自动补偿操作
6)数据分析
7)关机程序：重点强调实验结束后必需认真进行仪器清洗。
8)关闭仪器电源，倾倒废液，清理桌面垃圾。
3.考核
包含理论考试和上机操作考试。
(1)理论考试：
书面闭卷考试，包括简答题10道，满分100分，80分以上为通过。内容包含理论课和上机实践课内容。
* 请已经完成上机培训的人员至平台申请考试。
(2)上机考试：
请自带样本，要求准备Fortessa X20 3色多色上机实验，熟练掌握上机前准备、开机、Diva软件操作、补偿设置、工作表建立、样本收集及数据记录、数据简单分析、清洗流程和关机流程。
* 理论考试通过后，可向平台申请上机考试。
(3)考核通过后，需签署“平台使用同意书”，承诺依照平台管理条例规范使用仪器。
培训申请表.docx
海南省医学科学院流式平台管理条例.docx
五、管理条例
1．预约准则：
(1) 所有用户必须通过平台培训和考核，获得使用资格后才能预约上机。超过3个月未使用仪器的自助上机用户将成为休眠用户，再次使用时需要重新考核。
(2) 获得仪器使用资格后，用户可登陆预约系统，注册个人账号，进行网上仪器预约。
(3) 网上预约须使用本人账号，严禁借用或者借给他人使用个人账号，一经发现双方账号都将被封禁。
(4)预约规则：分析仪和分选仪均最早可提前7天预约。
(5)开放时间：
1)分析仪开放时间：6:00-24:00。
2)分选仪开放时间：工作日9:00-12:00,13:30-17:00。
3)如需在开放时间外使用仪器，需提前48小时联系平台工作人员报备。
(6)取消预约：网上取消预约需提前至少12小时。0-12小时内取消预约须联系平台人员操作，并按照预约时长的50%收费；分选预约网上取消后须同时告知平台工作人员。
(7)违反预约：
1)用户应按照预约时间上机，平台按照预约时间收费。用户超出预约时间的，平台按照占用仪器时间（预约时长+超出时长）收费；
2)预约不使用（爽约）：用户爽约按照预约时长收费，并关停账号两周。
(8)预约时长：每人每日预约单台仪器时长不得超过5小时，若确实需要更长时间，需联系管理员，且5小时以上分析仪使用预约取消时间提前至24小时。
2．用户责任：
(1)上机操作须由自助上机用户本人完成，或在自助上机用户本人现场指导下由被指导人完成。用户本人不在的情况下交由他人操作仪器将被取消使用资格。
(2)所有样本上机运行前必须使用70um滤网过滤，防止机器管道堵塞。建议样本在上机前现场过滤，若发现样品不符合上样要求导致管道堵塞，首次发现警告提醒，第二次通知所属课题组PI并关停账号两周。
(3)所有用户需严格按照标准操作流程SOP使用各台仪器（SOP贴于各台仪器上）。上机操作前，如发现设备管道堵塞或液流异常，请及时向平台工作人员报告，由平台工作人员排除故障并记录冲洗处理等故障排除操作的具体用时。对于因前置位操作不当导致的设备问题，平台将视具体情况追究责任。实验结束后，必须按操作流程要求对仪器进行清洗。清洗结束后，将仪器设置Low/Standby状态。如有违规者首次发现警告提醒，第二次发现通知所属课题组PI并关停账号两周。
(4)所有用户在Diva软件和流式仪器相连计算机上建立文件夹时都需以: 课题组名→本人姓名→实验名称的方式命名。未按要求设置和存储的文件及文件夹将被删除。
(5)用户不得对仪器硬件和电脑上的软件进行更改或移动。
(6)平台用户在使用过程中，须向工作人员报告仪器故障情况，以便及时联系工程师维护。
(7) 每天最后一个（非工作时间）使用仪器的用户负责关机并及时完成关机汇报。
(8)请保持流式平台整洁，实验完成后清理流式工作台，带走产生的废弃物并按生物安全要求处理垃圾。违反此项规定将被通报并关停账号1周。
(9)流式分析室和分选室内均安装监控摄像，用户进入流式实验室后需严格按照实验室安全规范和仪器操作规程使用仪器，严禁喧哗吵闹。违反规定将被禁止进入平台。
(10)分选用户须提前12小时与平台老师沟通分选需求信息。
3．数据存储：
(1)Diva软件及平台计算机内文件命名方式请参考：用户责任2。
(2)实验结束后，请立即将数据从Diva软件导出并上传至学校云盘，但在学校云存储完成前，必须使用平台格式化u盘拷贝实验数据。不允许DIVA中导出的实验数据留存于电脑桌面，平台有权删除桌面数据文件，不再另行通知。如需清理Diva软件内数据，平台将提前通知用户，用户须配合完成。
4．违反管理条例：
(1)以下情况一经发现将立即取消用户资格：
1)网上预约必须使用实名登记，严禁冒名预约，严禁借用或者借给其他人使用个人卡。预约人和实际上机人必须相同。
2)禁止将仪器置于RUN位置而无人看管状态，用户如需在实验中途离开，请自觉停止上样并将仪器设置为Low/Standby状态，不允许请其他人帮助上样。
(2)其他违反预约准则、用户责任和数据存储等行为, 需在流式平台工作人员监督下对平台进行一个月的公共服务，服务内容包括: 1）平台所有仪器的日清洗，周清洗和月清洗；2）每日流式分析和分选室的清洁卫生。
(3)违反上述“4.违反管理条例-（2）” 两次及以上者，将被取消用户资格。
(4)对于违规操作并造成损失的用户，需要追究相应的事故责任和进行经济赔偿。对于故意违反规定，造成严重损失的，除了经济赔偿，还将考虑行政上的处分，记入个人档案。对于责任的认定，在事实确凿的基础上，由医科院流式平台界定，违规者有申辩的权利。
5．紧急情况处理：
遇到仪器故障及时向平台老师报告；工作外时间，请拨打求助电话：BD Engineer刘新富18588869400，BD Engineer 卞金伟 13764192557；黄小丹18289714894。
本条例最终解释权归流式平台，未尽事宜由流式平台另行通知。
六、联系我们
沈蕾（平台负责人）
邮 箱：hy2024023@muhn.edu.cn
电 话：15821168557
办公室：海口市龙华区椰海大道352号苍峄路东侧海南省医学科学院2楼203-4室
黄小丹
邮 箱：hy0224004@muhn.edu.cn
电 话：18289714894
办公室：海口市龙华区椰海大道352号苍峄路东侧海南省医学科学院2楼P202室
